细胞生物学
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细胞划痕实例：研究某抗肿瘤药物对肿瘤细胞迁移的影响
2019/9/3
1.实验原理：细胞划痕法是测定肿瘤细胞运动特性方法之一，其借鉴体外细胞致伤愈合实验模型，在体外培养的单层细胞上划痕致伤，加入药物观察其抑制肿瘤细胞迁移的能力。
2.实验材料：
1）细胞系及其培养：肝肿瘤细胞HepG2。
2）24孔板 移液器 倒置显微镜。
3）主要试剂：PBS DMEM培养液 0.25%胰酶胎牛血清 5-氟尿嘧啶溶液（1μg/mL）。
3.实验步骤：
1）制备单层细胞：细胞密度5~10x105/mLHepG2细胞铺于24孔板（每孔500μL）上，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液培养16~24h，使形成单层细胞。
2）划痕：以5-氟尿嘧啶（5-Fu）为例，首先配制1μg/μL母液（使用无菌蒸馏水配制，精密量取），取45μL该母液用PBS稀释至1.1mL，得浓度40μg/mL 5-Fu溶液，用10μL移液枪枪头（或者无菌牙签）在单层细胞上呈一字划痕，用PBS清洗3次，然后加入上面配好5-Fu溶液，平行两个样本，孵育24h，换成含10%胎牛血清的DMEM培养液孵育24h。
3）观察并拍照：吸去培养液，用PBS清洗3次，倒置荧光显微镜下观察并拍照。
2.实验材料：
1）细胞系及其培养：肝肿瘤细胞HepG2。
2）24孔板 移液器 倒置显微镜。
3）主要试剂：PBS DMEM培养液 0.25%胰酶胎牛血清 5-氟尿嘧啶溶液（1μg/mL）。
3.实验步骤：
1）制备单层细胞：细胞密度5~10x105/mLHepG2细胞铺于24孔板（每孔500μL）上，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液培养16~24h，使形成单层细胞。
2）划痕：以5-氟尿嘧啶（5-Fu）为例，首先配制1μg/μL母液（使用无菌蒸馏水配制，精密量取），取45μL该母液用PBS稀释至1.1mL，得浓度40μg/mL 5-Fu溶液，用10μL移液枪枪头（或者无菌牙签）在单层细胞上呈一字划痕，用PBS清洗3次，然后加入上面配好5-Fu溶液，平行两个样本，孵育24h，换成含10%胎牛血清的DMEM培养液孵育24h。
3）观察并拍照：吸去培养液，用PBS清洗3次，倒置荧光显微镜下观察并拍照。
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